Quelques expériences in vitro

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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar dede718 » 29 Juin 2016 14:10

Superbe ! =) les photo sont très jolies
N'hésites pas à détailler ton protocole dans un post, c'est toujours sympa ce genre d'informations !
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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar arnaudcarni » 14 Juil 2016 17:50

vraiment super ! bravp ! :)

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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Jardimanche » 18 Juil 2016 16:22

Magnifique Franck!
En appui avec dede718, pourrais tu préciser le milieu utilisé, son pH.... Quelques détailles qui seraient vraiment intéressant?
Bravo pour cette réussite!

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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Franck31620 » 16 Déc 2016 14:25

Merci pour tous vos commentaires (avec beaucoup de retard!!!).
Promis, j'ouvrirais un post sur mes conditions de culture in vitro (un jour...).
Pour le moment, je partage avec vous mon nouveau défis in vitro: LA CULTURE DE MÉRISTÈME.
Un méristème est une zone de la plante où les cellules prolifèrent. Il est constitué de cellules indifférenciées, capables de se diviser longtemps après la fin de l'embryogenèse.
C'est la technique qu'utilisent les Hollandais pour multiplier les Phalaenopsis et autres (même les plantes carnivores)
Je fais mes premiers essais sur des graines de Darlingtonia californica commandées chez Carnilandes (Au passage, bravo pour la fraicheur!).
Les plus gros challenges sont d'opérer en conditions stériles (hotte à flux laminaire) sur des ordres de grandeur du 1/10ème de mm (loupe binoculaire) et de trouver le bon milieu de culture...
Première étape, la dissection sous loupe binoculaire. Sur la photos ci-dessous, l'espace entre deux traits est de 1 mm (réglet).

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Détail des téguments qui demandent un processus de stérilisation 'violent'

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Mise en évidence de l'embryon qui sera prélevé et mis en culture.

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Suite au prochain épisode...
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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Vince81 » 16 Déc 2016 20:02

Ca c'est bien intéressant !

Il me semble qu'une des choses difficiles, c'est notamment de stériliser le méristème sans le cramer ? Typiquement dans le cas d'un Nepenthes ou d'un Heliamphora ?

J'espère que tu vas gérer le coup, et trouver le milieu adéquat :wink:.
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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Franck31620 » 17 Déc 2016 9:02

Merci pour tes encouragements Vincent.
stériliser le méristème sans le cramer

Le méristème est stérile par nature, même chez une plante virosée. Si tu travailles proprement tu n'as pas besoin de le stériliser.
C'est l'un des principaux intérêts de la culture in vitro, à l'opposé du clonage intensif.
Tu peux sauver une plante rare mais virosée, ou bien multiplier (clones) un individu rare en collection.
Récemment, un collectionneur m'a contacté au sujet d'un Nepenthes Jamban femelle qui faisait la gueule...
Je vais me faire la main sur des hookeriana et ventricosa, j'en ai à la pelle ;)

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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar gabgabinou » 17 Déc 2016 13:29

Vince81 a écrit:Il me semble qu'une des choses difficiles, c'est notamment de stériliser le méristème sans le cramer ? Typiquement dans le cas d'un Nepenthes ou d'un Heliamphora ?

J'espère que tu vas gérer le coup, et trouver le milieu adéquat :wink:.


Quand tu dis cramer, c'est parceque pour le stériliser tu le passe au dessus de la "flamme" ou le cramer a cause d'un produit désinfectant trop "fort" ?

En tout cas, le post est vraiment trèèèès intéressant !
Je vais suivre ça de très prêt !

Une autre question, une zone méristématique est toujours stérile tu dis. Dans n'importe quelle partie de la plante ?
Chez un nep, où peut-on les trouver pour être sure de ne pas sacrifier une plante pour rien inutilement ?
Les plus anciens jardiniers disaient :

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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Franck31620 » 18 Déc 2016 10:04

Quand tu dis cramer, c'est parceque pour le stériliser tu le passe au dessus de la "flamme" ou le cramer a cause d'un produit désinfectant trop "fort" ?


On réserve la flamme pour les instruments (scalpels, foreceps...)
Pour les plantes, on utilise des produits chimiques comme l'eau de javel, l'eau oxygénée...plus ou moins dilués pour bien stériliser mais pas tuer le tissu.

Une autre question, une zone méristématique est toujours stérile tu dis. Dans n'importe quelle partie de la plante ?


Le schéma ci-dessous (désolé pour mes compétences de dessinateur très limitées!)montre les différentes zones méristématiques. En général, on décapite la plante pour utiliser le Méristème apical
caulinaire et un ou plusieurs Méristèmes axillaires. La plantes à toujours la possibilité de repartir d'un bourgeon axillaire.

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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Vince81 » 18 Déc 2016 16:23

Pour la stérilisation, je pensais à la stérilisation des tissus pour la mise en milieu de culture. Tu me contrediras si je me trompe, mais il est plus difficile de récupérer le méristème sans contamination d'une plante en pleine croissance, que de stériliser une graine pour débuter dans l'IV.

Je pensais bien à ça :
pour bien stériliser mais pas tuer le tissu


Faut que tu te fasses vite la main avant que le N. jamban ne crève !
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Re: Quelques expériences in vitro

Messagepar Franck31620 » 18 Déc 2016 19:41

il est plus difficile de récupérer le méristème sans contamination d'une plante en pleine croissance, que de stériliser une graine pour débuter dans l'IV.

Tu as tout à fait raison Vincent, même s'il faut, dès la collecte des graines prendre le plus grand soin à ce qu'il n'y ai pas d'éléments étrangers (reste de pistil, de capsule...).
La CIV à partir de tissu demande à mon avis de maîtriser très correctement la CIV à partir de graines.
Si ça t'intéresse, tu peux venir faire une petite cession de CIV chez moi. Philippe est sur les rails (il va venir repiquer ses Aechmea lueddemanniana), hein Philippe :-D et Julien m'a fait le plaisir de passer une journée avec moi pour me perfectionner dans l'utilisation de la hotte à flux laminaire.
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