stérilisation

Ce forum est dédié à la culture in vitro des plantes carnivores (technique, milieux de cultures, etc.)

stérilisation

Messagepar Carnilex » 23 Nov 2006 18:48

Salut,
Comment fait-on pour stériliser un tissu ou une feuille ?
Et est-ce que c' est possible de faire passer une plante cultivé en pot à une culture in-vitro ? ( je ne pense pas )
Merci

 
Messages: 755
Enregistré le: 15 Sep 2006 18:34
Localisation: Alsace 68 Kaysersberg

Messagepar kaqtuz » 23 Nov 2006 19:19

stériliser un tissu ou une feuille, je sais pas, mais pour stériliser des objets type couteau: deux solutions:soit tu brûle le couteau, soit tu le lave avec de l'acool à 90°.

 
Messages: 110
Enregistré le: 10 Nov 2006 19:14

Re: stérilisation

Messagepar Districarnivores » 01 Déc 2006 9:28

Carnilex a écrit:Comment fait-on pour stériliser un tissu ou une feuille ?


=> On utilise de la javel et on rince avec de l'eau stérile.

Carnilex a écrit:Et est-ce que c' est possible de faire passer une plante cultivé en pot à une culture in-vitro ? ( je ne pense pas )
Merci


=> Tout est une question de taille! En général on utilise un tronçon de feuille de 0,5 à 1cm (Drosera & Ping).

Avatar de l’utilisateur
Vendeur professionnel
 
Messages: 196
Enregistré le: 28 Fév 2006 20:57
Localisation: Alsace

Messagepar François » 01 Déc 2006 18:31

en labo,j'utilisais du Domestos (produit pour les wc ! ) dilué à 10%
trempage 10mn (pour des feuilles) et rinçage trois fois à l'eau stérile.
François alias "l'Ancien" alias " Le Vieil Arbre"

 
Messages: 809
Enregistré le: 16 Sep 2004 6:15
Localisation: Aire sur l Adour (landes)

Messagepar xavdeg » 19 Déc 2006 1:32

on a d'autre produit (g un trou zut) même efait que la javel mais ne renter pas dans les tissu (pour mes graines d'orchidées c'est top)
les instrument flambé a l'alcool
le reste (milieu boite de petri) 20 min a 125°c (a verifier)

++

 
Messages: 51
Enregistré le: 04 Oct 2006 21:04
Localisation: capesterre belle eau, guadeloupe

Messagepar Zender » 03 Mar 2007 1:54

Étant donné que dans la culture in vitro, la vrai clef du succès est la stérilisation du matériel végétal, j'ai donc essayé de retrouver tous les protocoles qui ont été énoncé dans plusieurs topic. Donc voilà ce que j'ai trouvé :

Pour les graines :

Domestos (produit pour les wc ! ) dilué à 10% et rinçage trois fois à l'eau stérile. Mais la encore pour les graines j'ai pas trouvé de temps de trempage.

Hypochlorite de calcium à 4% en saturation (pas en rapport poids/volume) sans rinçage. Encore une fois il n'y a pas de temps de trempage.

Eau de javel dilué au 1/5 ou 1/10, durée de stérilisation pour Drosera environ 5-8 min.
Il faut bien rincer 3x les graines avec de l'eau stérile.

Alcool à 70% durée de stérilisation : 3 minutes.
Mais la encore tout dépend de la taille de la graine. Les 3 minutes correspondaient à des graines de dionées.

Pour des tissus :

Domestos (produit pour les wc ! ) dilué à 10%
trempage 10mn et rinçage trois fois à l'eau stérile.

Eau de Javel dilué au 1/4 comme indiqué sur l'emballage et trempage jusqu'à que les bords des tissus coupés deviennent blancs puis 3 rinçage à l'eau stérile. Ne pas oublier de couper les bords blancs avant d'implanter le végétal dans le milieu. Je pense que pour les tissus il s'agit d'un des meilleurs protocole puisqu'on a pas besoin de chronométrer. Le problème c'est qu'il faut 3 flacons d'eau stérile et un support stérile pour pouvoir couper les tissus morts

Finalement le plus embêtant c'est la stérilisation des graines. Mais par expérience, ce que j'ai pu observer c'est que plus les graines sont fraîches plus la réussite de la stérilisation est élevé. J'ai pu voir ça en cours où 5 boites de pétri ont été ensemencés chacune avec environ une 20ene de graine de kiwi qui venait d'être mangé. Aucune contamination. J'ai fait exactement la même stérilisation (eau de Javel 1/4 pendant 8-10 minutes) mais avec mes graines de dionée qui ont passé l'hiver dans un frigo. Toutes ont été contaminées.

Voilà j'ai essayé de faire un résumer de toutes les stérilisation possible mais beaucoup de détails manquent. Si quelqu'un pourrai compléter les "recettes" ce serai pas mal, sa éviterai de faire énormément de manipulation avant de trouver le meilleur protocole. :wink:

 
Messages: 54
Enregistré le: 01 Mar 2007 12:17
Localisation: Altkirch

Messagepar Zender » 04 Mar 2007 14:17

Hello tlm,
J'ai une question à propos de l'alcool. Sur plusieurs sites j'ai pu lire que l'alcool à 70 est inéficace contre les spores.

J'ai pu aussi lire que
L’iode, au contraire de l’alcool, est sporicide


Ma question est donc simple : pourquoi n'utilise t on pas de l'alcool iodé 1% puisqu'il semble être plus éfficace? Je n'est absolument rien trouvé à propos de la culture in vitro et de l'alcool iodé et c'est d'autant plus étrange puisque ce point est crucial car des graines placé au frigo pour la stratification favorise la sporulation. En effet le froid est défavorable pour la croisance du champignon ou de la bactérie qui finissent par sporuler afin résister au froid puis de pouvoir se redévelopper quand les conditions seront meilleur, entre autre dans nos chère petit pots de culture in vitro :evil:.

Peut être que l'iode est trop agressif pour les graines ou les tissus?

Si quelqun a une idée sur ce point il est le bienvenue.

 
Messages: 54
Enregistré le: 01 Mar 2007 12:17
Localisation: Altkirch

Messagepar François » 05 Mar 2007 19:28

salut,
c'est vrai que je n'ai jamais entendu parler de l'utilisation de l'iode comme désinfectant en culture in vitro. Peut être que ça a été tenté et que ça n'a pas marché...et le problème, c'est que quand une manip foire, le résultat n'est pas publié, :D , c'est dommage, ça serait enrichissant . Mais d'après ce que j'ai pu lire, l'hypochlorite de sodium a aussi une activité sporicide qui doit sans doute être suffisante pour l'utilisation en culture in vitro.
François alias "l'Ancien" alias " Le Vieil Arbre"

 
Messages: 809
Enregistré le: 16 Sep 2004 6:15
Localisation: Aire sur l Adour (landes)

Messagepar xavdeg » 14 Mar 2007 22:54

François a écrit:en labo,j'utilisais du Domestos (produit pour les wc ! ) dilué à 10%
trempage 10mn (pour des feuilles) et rinçage trois fois à l'eau stérile.


10% !!!
je suis entrain de faire un stage et on a mis des tige de hampe de phal a 70% de domesto pendant 30 min... (et g eu des infections...)
et je tien a signalé que mon tissu n'est oas mort je vien de voir de c'est reparti

 
Messages: 51
Enregistré le: 04 Oct 2006 21:04
Localisation: capesterre belle eau, guadeloupe

Messagepar kohleric » 14 Mar 2007 23:41

Salut François,

François a écrit:...Mais d'après ce que j'ai pu lire, l'hypochlorite de sodium a aussi une activité sporicide qui doit sans doute être suffisante pour l'utilisation en culture in vitro.


attention avec l'hypochlorite, c'est un réducteur puissant qui est aussi un CMR (Cancérigène et/ou Mutagène et/ou toxique pour la Reproduction) donc il faut bien se laver les mains après utilisation (ou utiliser des gants).
J'en ai utiliser il y a quelques années (sur des minéraux, pas du vivant) et effectivement c'est "puissant".

Jardinier Impérial de mon balcon
 
Messages: 2441
Enregistré le: 25 Fév 2005 17:35
Localisation: Champs sur Marne (77)

Suivante

Retourner vers Culture "in-vitro"

Qui est en ligne

Utilisateurs parcourant ce forum : Aucun utilisateur enregistré et 1 invité

cron