coucou à tous,
j'ai un petit problème pour la préparation de milieus de culture: j'ai commandé aux jardins du brisard des milieux de culture en poudre (pour nepenthes et drosera, pour 250mL), et ils ne m'ont envouyés aucune notice. Je supose que je dois dissoudre cette poudre dans 250 mL de l'eau distillée, mais je ne sais pas comment il faut stériliser le milieu. Il est indiqué sur le flacon :"20°C max", donc il ne peut pas etre autoclavé (faudrait-il le filter? ça ma parait bizard).
Je les ai contacté par mail, mais je n'ai aucune réponse.
Si quelqu'un à la solution, qu'il me fasse signe
Merci d'avance, @+
problème pour la prépération d'un milieu
problème pour la prépération d'un milieu
TATAAT Boxe
Heureux l'étudiant qui, comme la rivière, arrive à suivre son cours sans sortir de son lit ... :-)
Marraine du BHOF
Heureux l'étudiant qui, comme la rivière, arrive à suivre son cours sans sortir de son lit ... :-)
Marraine du BHOF
Salut,
Le 20°C max concerne en fait la température de stockage du milieu sous forme de poudre. Mais pour le stériliser, il faut obligatoirement l'autoclaver. Pour cela deux façons de procéder:
-Soit tu dissous la poudre dans les 250 mL d'eau distillée au bain-marie et/ou microonde puis tu réparti le milieu dans des flacons que tu vas stériliser à la cocotte-minute (30 minutes sous pression, quand la soupape tourne).
-Soit tu verses la poudre dans les 250 mL d'eau et tu stérilise directement à la cocotte (comme ci-dessus, la poudre va se dissoudre) pour répartir ensuite le milieu dans des flacons déjà stériles.
Personnellement, je préfère la deuxième solution mais pouvoir trouver des flacons stériles facilte grandement la tâche. Tu devrais pouvoir en trouver facilement dans un labo (flacons en plastique style propipi ou falcon).
A+
Le 20°C max concerne en fait la température de stockage du milieu sous forme de poudre. Mais pour le stériliser, il faut obligatoirement l'autoclaver. Pour cela deux façons de procéder:
-Soit tu dissous la poudre dans les 250 mL d'eau distillée au bain-marie et/ou microonde puis tu réparti le milieu dans des flacons que tu vas stériliser à la cocotte-minute (30 minutes sous pression, quand la soupape tourne).
-Soit tu verses la poudre dans les 250 mL d'eau et tu stérilise directement à la cocotte (comme ci-dessus, la poudre va se dissoudre) pour répartir ensuite le milieu dans des flacons déjà stériles.
Personnellement, je préfère la deuxième solution mais pouvoir trouver des flacons stériles facilte grandement la tâche. Tu devrais pouvoir en trouver facilement dans un labo (flacons en plastique style propipi ou falcon).
A+
Pour examiner la vérité il est besoin une fois en sa vie, de mettre toutes choses en doute autant qu'il se peut.
René Descartes
René Descartes
coucou,
merci pour tes reponses, tu connais la composition de ces milieux de culture? Je ne l'ai pas trouvé.
Il me semblait que certains constituants des milieux ne pouvaient pas etre autoclavés car ils sont dénaturés pas la chaleur ( hormones par exemple) et qu'il fallait les rajouter stérilement (par filtration) avant que le milieu se solidifie.
Je sais qu'il y a toujours un vaste fossé entre la théorie et la pratique...
En ce qui concerne le materiel, je vai negocier avec un labo de culture cell, on ne sait jamais.
@+
merci pour tes reponses, tu connais la composition de ces milieux de culture? Je ne l'ai pas trouvé.
Il me semblait que certains constituants des milieux ne pouvaient pas etre autoclavés car ils sont dénaturés pas la chaleur ( hormones par exemple) et qu'il fallait les rajouter stérilement (par filtration) avant que le milieu se solidifie.
Je sais qu'il y a toujours un vaste fossé entre la théorie et la pratique...
En ce qui concerne le materiel, je vai negocier avec un labo de culture cell, on ne sait jamais.
@+
TATAAT Boxe
Heureux l'étudiant qui, comme la rivière, arrive à suivre son cours sans sortir de son lit ... :-)
Marraine du BHOF
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Marraine du BHOF
resalut,
Normalement les milieux sont envoyés "prêt à autoclaver" donc sans rien à ajouter, par contre il faut faire attention à ce que le flacon contenant le milieu ne soit pas en contact direct avec l'eau se trouvant au fond de ton autoclave ou ta cocotte car il paraît que ça pourrait dénaturer certaines substances comme les hormones ou vitamines, mais je n'en sais pas plus. Sinon, pour les compositions, j'ai trouvé:
Milieu de Murashige & Skoog M.S. (pour un litre de solution).
Ce milieu est la base de la composition de nombreux milieux de culture.
Macroéléments: - NH4NO3 1,650 g. - KNO3 1,9 g. - CaCl2, H2O 0,44 g. - MgSO4, 7 H2O 0,370 g. - KH2PO4 0,170 g.
Microéléments : - H3BO3 6,2 mg. - MnSO4, 4 H2O 22,3 mg. - ZnSO4, 7 H2O 8,6 mg. - Kl 0,83 mg. - Na2MoO4, 2H2O 0,25 mg. - CuSO4, 5 H2O 0,025 mg. - CoCl2, 6 H2O 0,025 mg.
Fer : FeSO4, 7 H2O 2,78 g. Na2 EDTA 3,73 g.
Milieu de culture pour Sarracénias : (pour un litre)
Macro M.S. 2/3 (dilué au 2/3) Micro M.S. 1/1 Fer 1/1 BAP 2,25 mg/l AIB 0,2 mg/l Saccharose 30 g/l Agar 8 g/l pH= 5,7 Vitamines Linsmaier & Skoog : Thiamine 0,4 mg/l Myo-inositol 100 mg/l
Milieu de culture pour Droséras :
Macro M.S. 1/2 Micro M.S. 1/1 Fer 1/1 Vitamines Linsmaier & Skoog : BAP 0,5 mg/l AIB 0,5 mg/l Saccharose 30 g. Agar 7 g. pH= 5,7
Milieu de culture pour Céphalotus follicularis :
Macro M.S. 1/2 Micro M.S. 1/2 Fer 1/1 Vitamines de Linsmaier & Skoog BAP 1 mg/l AIB 0,1 mg/l Saccharose 30 g/l Agar 8 g/l pH= 5,7 Milieu de KNUDSON. (Pour un litre de milieu)
Ca(NO3)2, 4 H2O 1 g. KH2PO4 0,25 g. MgSO4, 7 H2O 0,25 g. (NH4)2SO4 0,5 g. FeSO4, 7 H2O 0,025 g. MnSO4, 4 H2O 0,0075 g. Saccharose 20 g. Agar 8 g. pH= 5
J'ai trouvé ces informations à l'adresse http://membres.lycos.fr/dionaea/bulleti ... d_28_a.htm
tu devrais y jetter un oeil, c'est très intéressant.
A++
Normalement les milieux sont envoyés "prêt à autoclaver" donc sans rien à ajouter, par contre il faut faire attention à ce que le flacon contenant le milieu ne soit pas en contact direct avec l'eau se trouvant au fond de ton autoclave ou ta cocotte car il paraît que ça pourrait dénaturer certaines substances comme les hormones ou vitamines, mais je n'en sais pas plus. Sinon, pour les compositions, j'ai trouvé:
Milieu de Murashige & Skoog M.S. (pour un litre de solution).
Ce milieu est la base de la composition de nombreux milieux de culture.
Macroéléments: - NH4NO3 1,650 g. - KNO3 1,9 g. - CaCl2, H2O 0,44 g. - MgSO4, 7 H2O 0,370 g. - KH2PO4 0,170 g.
Microéléments : - H3BO3 6,2 mg. - MnSO4, 4 H2O 22,3 mg. - ZnSO4, 7 H2O 8,6 mg. - Kl 0,83 mg. - Na2MoO4, 2H2O 0,25 mg. - CuSO4, 5 H2O 0,025 mg. - CoCl2, 6 H2O 0,025 mg.
Fer : FeSO4, 7 H2O 2,78 g. Na2 EDTA 3,73 g.
Milieu de culture pour Sarracénias : (pour un litre)
Macro M.S. 2/3 (dilué au 2/3) Micro M.S. 1/1 Fer 1/1 BAP 2,25 mg/l AIB 0,2 mg/l Saccharose 30 g/l Agar 8 g/l pH= 5,7 Vitamines Linsmaier & Skoog : Thiamine 0,4 mg/l Myo-inositol 100 mg/l
Milieu de culture pour Droséras :
Macro M.S. 1/2 Micro M.S. 1/1 Fer 1/1 Vitamines Linsmaier & Skoog : BAP 0,5 mg/l AIB 0,5 mg/l Saccharose 30 g. Agar 7 g. pH= 5,7
Milieu de culture pour Céphalotus follicularis :
Macro M.S. 1/2 Micro M.S. 1/2 Fer 1/1 Vitamines de Linsmaier & Skoog BAP 1 mg/l AIB 0,1 mg/l Saccharose 30 g/l Agar 8 g/l pH= 5,7 Milieu de KNUDSON. (Pour un litre de milieu)
Ca(NO3)2, 4 H2O 1 g. KH2PO4 0,25 g. MgSO4, 7 H2O 0,25 g. (NH4)2SO4 0,5 g. FeSO4, 7 H2O 0,025 g. MnSO4, 4 H2O 0,0075 g. Saccharose 20 g. Agar 8 g. pH= 5
J'ai trouvé ces informations à l'adresse http://membres.lycos.fr/dionaea/bulleti ... d_28_a.htm
tu devrais y jetter un oeil, c'est très intéressant.
A++
Pour examiner la vérité il est besoin une fois en sa vie, de mettre toutes choses en doute autant qu'il se peut.
René Descartes
René Descartes
salut,
Oui, je coule simplement le milieu dans les flacons près du petit brûleur de la cuisinière, ça ne pose aucun problème tant qu'on est dans la zone de stérilité (dans un rayon d'environ 20 cm autour du brûleur). En tout cas, je n'ai jamais eu de problème de contaminant en coulant mes milieux.
A+
Oui, je coule simplement le milieu dans les flacons près du petit brûleur de la cuisinière, ça ne pose aucun problème tant qu'on est dans la zone de stérilité (dans un rayon d'environ 20 cm autour du brûleur). En tout cas, je n'ai jamais eu de problème de contaminant en coulant mes milieux.
A+
Pour examiner la vérité il est besoin une fois en sa vie, de mettre toutes choses en doute autant qu'il se peut.
René Descartes
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