Sterilisation des graines pour la culture in vitro
La premiere etape de culture in vitro est la sterilisation du materiel (graines ou autres). Cette etape est cruciale et delicate, car soit on ne fait pas assez (on n'a pas tue tous les "germes", qui vont vite proliferer et envahir le milieu de culture in vitro), soit on fait trop fort (on a tout tue, graines comprises...). Il existe de nombreuses "recettes", plus ou moins basees sur l'utilisation d'eau de Javel ou d'autres produits hypochlores. En voici donc une de plus: celle que j'utilise depuis 4-5 ans.
Le desinfectant que j'utilise est un produit commercial du nom de "Taharsept", desinfectant a des fins multiples (veterinaires, agricoles, alimentaires, sanitaires, etc.), servant par exemple a desinfecter, en fonction de la dose, des plantes, de l'eau, les mains, etc.... D'apres ce que j'ai compris, il a ete mis au point par une companie irlandaise (Medentech), qui le vend, je crois, sous le nom d' Aquasept, et on peut donc en savoir plus sur leur site web [
http://www.medentech.com/index.cfm]. A vrai dire, comme je ne reside pas en France (ou autre pays francophone), je ne sais pas si cela y est trouvable, mais si non, il doit etre possible de commander (par le web). Ce que je sais, c'est que Taharsept se vend (ou se commande) dans des grandes pharmacies en Israel...
Bon, ceci dit, l'interet de ce produit, c'est que ca se presente sous la forme de tablettes, ou pillules "seches", et donc c'est facile et non dangereux a manipuler et a conserver; mais surtout, le grand avantage, c'est que ca marche! En effet, sans entrer dans les details, le principe active (le troclosene de sodium -
http://www.animalhealth.bayer.com/ah/po ... enDocument) n'est pas le meme que d'autres hypochlorites, et permet une efficacite accrue avec une toxicite moindre. Et de fait, avec le protocole qui suit, je n'ai pas observe de toxicite sur mes graines (meme celles de Nepenthes, qui sont dites fragiles).
Entrons dans le detail:
J'utilise un melange a 5.2g/3litres (5.2 g, une tablette entiere, dans 3 litre d'eau sterilisee), auquel j'ajoute quelques gouttes de "Tween" (par exemple 10microlitre pour 40mililitres) (c'est une sorte de detergent de labo, qui joue le role de mouillant; il peut donc surement etre remplace par du savon ou du produit a vaisselle). Je garde cette solution dans une petite bouteille fermee, a la temperature ambiante, pour des mois.
A 99%, ce sont des graines que je sterilise.
En "routine":
- je trempe mes graines 3 a 5 minutes dans cette solution, en agitant de temps en temps
- je rince avec de l'eau sterile (c'est a dire, passee prealablement a l'autoclave, ou cocotte-minute) de 3 a 5 fois.
- c'est tout: je mets sur mon milieu de culture. Eventuellement on peut faire une priere, mais ca marche tres bien sans....
En fait, ce n'est pas tout, car j'ai un autre "truc": je mets un produit dans mes milieux de culture qui s'appelle "ppm", qui est un produit americain pour la culture in vitro. La encore, je vous invite a aller voir le site [
http://www.ppm4plant-tc.com/], et la encore, je ne sais pas si c'est disponible en France (je crois en fait, qu'ils cherchent un distributeur; a bon entendeur....), mais apparemment ca peut se commander en ligne. Le principe actif entre dans les cellules des bacteries et moisissures, qu'il tue, mais ne peut penetrer dans les cellules vegetales. Le producteur montre se produit un peu comme miraculeux; je ne serais pas aussi enthousiaste (dans certains cas, j'ai toujours des contaminations dont je ne peux me debarrasser), mais ce qui est sur, c'est que ca ne fait pas de mal...
En routine, j'en mets dans mes milieux apres autoclave (mais ca peut etre mis avant), a raison de 0,1% (volume a volume).
En conclusion, cette petite recette marche bien dans l'ensemble. Il y a bien quelques cas ou je n'arrive pas bien a decontaminer mes graines (ou en tout cas, pas du premier coup), et il y a surtout des cas ou mes graines sont bien sterilisees, mais ne germent pas! Mais je ne sais si c'est parce que j'ai eut la main trop lourde, ou si mes graines n'etaient plus viables, ou si elles ne sont pas encore reveillees...