moisissures

[elio]

hello,
depuis quelques semaines, je me suis mis à l'in-vitro. A chaque fois c'est la même chose, au bout d'une ou deux semaines, des moisissures apparaissent.

Je ne sais pas pourquoi.

Je stérilise bien la gélose, je me fais vite le transfère des graines dans le pot.

Si vous pouvez m'aider dit le moi car je commence à désespérer.

[Shrek]

Je supposes que tu stérilises aussi tes graines ?

[DISKER]

Salut,

Ne désepère pas si vite, ce n'est pas du tout évident comme technique. C'est en effectuant un bon nombre de tentatives que tu vas acquérir les bons gestes et saisir les "trucs" à faire et ne pas faire, qui ne peuvent s'apprendre que par la pratique.

Concernant ton problème de contamination, il faudrait que tu nous en dise plus sur tes protocoles de stérilisation des géloses et graines. Les moisissures apparaissent-elles dans tout le milieu (y compris au coeur de la gélose) ou bien se développent-elles à partir des graines? as-tu essayé de garder un ou deux flacons, sans les ensemencer, à température ambiante pendant une ou deux semaine? etc...

A+

[elio]

Salut,
oui je stérilise mes graines.

Les moisissures apparaissent juste au dessus de la gélose.
Pour stériliser la gélose je la mets dans une cocotte minutes pendant 30 minutes après de sifflement.
Pour les graines le les laisse 2 minutes dans de l'hypochlorite mélangé avec de l'eau distillée.

je vais essayer de laisser un pot pendant une ou deux semaines sans rien dedans pour voir si c'est les graines qui ne sont pas bien stérilisées.

[François]

je vais essayer de laisser un pot pendant une ou deux semaines sans rien dedans pour voir si c'est les graines qui ne sont pas bien stérilisées.

il faudrait aussi faire une "fausse mise en culture" : fais exactement les mêmes gestes que quand tu mets en culture (prendre la pince, ouvrir le pot; etc..) mais sans rien mettre dans le pot. ça te permettra de voir si ce n'est pas ton mode opératoire qui serait à mettre en cause.

[elio]

Salut,
oui je vais essayer.

Je vous tiens au courrant.

[Amaury]

N'oublie pas de bien stériliser le matériel que tu utilises, de te laver les mains,... d'être le plus maniaque possible.

Amaury

[mij]

Salut.
Je ne pratique pas la CIV. J'ai souvenir qu'il y a un temps de désinfection des graines qui dépend du Genre, ce n'est pas le même temps pour des graines Cephalotus que pour Dionaea, etc.
Hormis la stérilisation des milieux et des contenants, les manipulations sont strictes et sous la flamme, dans un ordre précis, comme le stockage des flacons .
Si tu as des moississures, c'est que la technique n'est pas maitrisée et il me parait bien difficile de répondre précisément à tes interrogations. Il te faut revoir le mode opératoire.
jean rémi.

[Amaury]

Salut.
Je ne pratique pas la CIV. J'ai souvenir qu'il y a un temps de désinfection des graines qui dépend du Genre, ce n'est pas le même temps pour des graines Cephalotus que pour Dionaea, etc.

En effet, si tu ne les laisses pas assez longtemps dans la solution, elles ne seront pas stériles et si tu dépasses ce temps, tu risques de tuer la graine.
(J'ai remarqué que les graines de dionées sont assez résistantes, donc pour elles, tu peux dépasser le temps de quelques minutes, par contre, je n'en dirais pas autant pour les drosera).

Je te conseille de commencer la CIV de graines avant de passer au bouturage in vitro.
C'est bien plus difficile car les micro-organismes "colonisateurs de milieux" se trouvent à l'extérieur du tissu et à l'intérieur des cellules Il faut donc respecter rigoureusement le temps pour ne pas tuer les cellules en espérant avoir tuer les bactéries et autres micro-orga.

Bonne chance,

Amaury

[elio]

Salut,
pour le moment j'essaie avec les graines. J'ai toujours essayé avec des drosera et ils disent qu'il faut les laisser 2minutes.

A midi j'ai trouvé un pot avec de la gélose dedans que j'avais mis de coté. Il date du début du mois de janvier donc plus de 2 semaines alors je dois sûrement faire faut soit avec les graines ou les manipulations.

J'ai aussi remarqué que les moisissures n'apparaissaient pas près des graines. plutôt dans les borts.