Besoin d'aide pour civ de drosera.

Message par **TCHEUB** » 15 févr. 2006 19:47

Salut a tous

Je désire faire de la culture in vitro de drosera a partir de graines, mais j'ai qqs problèmes. J'ai fait qqs essais mais rien de concluant. Comment faite vous pour désinfecter les graines et surtout comment les récupérer ( elles sont si petites et en plus une fois mouiller c'est pas la joie) ?

Pour la désinfection j'utilise du Korsolin et de l'eau de javel mais l'eau de javel décolore les graines très rapidement, quel tps utiliser pour la désinfection ?
Si l'un d'entre vous avait un protocole a me donner ça serai sympa

Message par **maxouz** » 15 févr. 2006 20:39

Slt, alors les temps que l'on a mis moi et un ami pour la désinféction des graines éait de l'ordre de 30 secondes à 1 minute 30 s...

Pour la désinfection je te conseillerais :

-Deux chiffons
-Une pince
-Deux récipients
-Un masque de chirurgie
-Deux lampes à huile
-Une paire de gants (latex)
-Eau de javel
-Korselin

Protocole:

-Mets ton masque de chirurgie.

-Mets tes gants.

-Prends un chiffon trempe le dans l'eau de javel pendant 10 minutes,
ensuite étale le sur ta zone de travail...

-Installe ton milieu de culture dessus, sans l'ouvrir tous de suite.

-Allume une lampe à huile que tu placeras à coté de ton milieu de culture afin de faire "une bulle stérile".

-Ouvre ton milieu de culture.

-Puis prends ta pince et désinfecte là, dans l'eau de javel, et en allumant
ta deuxième lampe à huile passe là au dessus à chaque utilisation, afin d'etre sûr de sa stérélité .

-Prends tes récipients, et verse dans chacun l'eau de javel et le Korselin.

-Puis prends le 2ème chiffon et stérélise le aussi.

-étale le sur ta zone stérile, pis verse-y les graines dessus.

-Puis trempe le chiffon que tu auras soigneusement plié afin de ne pas perdre les graines au fond des récipients.

-Trempe les 30 secondes dans chaques récipients (Cela dépend de l'éspèce de Drosera et de la dureté des graines ou grosseur).

-Puis déplie le chiffon et avec la pince récupère les graines, normalement elles devraient se coller toutes seules sur la pinces.

-Et pour finir mets-les dans le milieu de culture...

VEILLE BIEN A CE QUE TA MANIPULATION SOIT LA PLUS STERILE POSSIBLE!!

A+ Max

Message par **TCHEUB** » 15 févr. 2006 20:59

Pour ce qui est du travail en milieu stérile j'ai l'habitude (merci aux TP de microbiologie

); de plus je possède un bec bunsen et une lampe a alcool). Pour le coup du chiffon je n'y avais pas penser (j'ai essayer avec du papier filtre mais c'est trop fragile).
Par contre pour la désinfection avec de l'eau de javel a 2.6% de c.a(chlore actif) en 5 minute mes graine avait perdu leur couleur c'est normal ?

Message par **carnico** » 15 févr. 2006 21:17

salut
je pense que 5min c trop long sauf si c'es des grosse graines
si tu les stérilise trop longtemps tu va tué la graines et là si ils devient bache c mauvais signe
avec moi elle sont resté normale
a+

Message par **maxouz** » 15 févr. 2006 21:22

J'allais répondre mais carnico, l'à fait...

Je pense aussi que cela est beaucop trop long, 1 minute irait tès bien...

A+ Max

Message par **TCHEUB** » 15 févr. 2006 21:35

Ok merci,

Il s'agissait de graine de D.binata, 5min ds le korsolin ne semble pas leur avoir fait subir de dommages, mais l'eau de javel c'est très rapide je les laisserai donc moins d'une minute.
combinent de bain de rinçage utiliser vous et de quel durer ?

Message par **carnico** » 16 févr. 2006 12:34

salut
moi pour des Drosera rotundifolia j'avais désinfecté pendant 3 min mais sans javel
si tu fait beaucoup de civ tu peut le faire avec une solution d'hypochlorite de calcium
je pense que la javel n'est pas un bon désinfectant il doit trop attaquer les graines

Message par **TCHEUB** » 16 févr. 2006 12:39

Ok, j'achetterai de l'hypochlorite de calcium a ma prochaine commande chez clivia. En attendant j'esserai avec que du korsolin, ca a l'air de bien marcher, dommage que ce produit n'existe plus.

Sinon rince tu tes graines dans de l'eau sterile apres la desinfection ?

Message par **carnico** » 16 févr. 2006 12:49

oui un petit peu mais pas spécialement

Message par **François** » 16 févr. 2006 13:17

en civ, en labo, on désinfectait au domestos (produit pour wc !) dilué à 10% et ça marchait bien (il y a à la fois de la javel et un agent mouillant dans ce produit). Mais 10% c'est probablement trop fort pour les pc, vu la taille des graines.

sinon, sur ce lien : http://www.omnisterra.com/botany/cp/slides/tc/tc.htm il y a une méthode de désinfection dans du papier filtre qui a l'air pas mal. est ce que quelqu'un l'a déjà testée ?